Anticuerpo Monoclonal de Ratón para el Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg, 5C3)

Este anticuerpo mancha el citoplasma de las células hepáticas positivas para el antígeno en pacientes con hepatitis viral tipo B. Este anticuerpo reacciona con el determinante «a» presente en todos los subtipos de HBsAg: adw2, adw3, ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, adw4 y adr. No reacciona con suero humano normal.

Formato: Este producto se suministra como un sobrenadante de cultivo celular y contiene azida sódica como conservante.

Principios de los procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica, primero, la unión de un anticuerpo primario al antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser utilizado en IHQ usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.

Dilución del anticuerpo primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems han sido optimizados para ser utilizados con el sistema de detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Materiales necesarios, pero no suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, controles y otros reactivos auxiliares están disponibles en Diagnostic BioSystems. Para más información, visite www.dbiosys.com.

Almacenamiento y manipulación: Almacenar a 2-8 °C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8 °C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas a las especificadas, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse de inmediato. Las porciones no utilizadas deben desecharse después de un día. La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deteriora y no debe ser utilizado.

**Los controles positivos y negativos deben ejecutarse simultáneamente con todas las muestras de los pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede explicarse por variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo.

Recogida y preparación de muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981; Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.

Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos del 0,1% no son materiales peligrosos notificables según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155/CE. La azida sódica (NaN3) utilizada como conservante es tóxica si se ingiere. La azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación, y todos los materiales expuestos a ellas deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con áreas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes a las especificadas pueden dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.

El tratamiento de los tejidos antes de la tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendada usando el sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de tinción: Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Control de calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (I/LA28-A2) CLSI Wayne, PA USA (www.clsi.org). 2011.

Localización celular: Citoplasma

Limitaciones del procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también pueden causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la Hepatitis B Antigen (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de presentación: La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.

Referencias:

1. Beasley et al. Lancet i, 1129, 1981.
2. Courouce et al. Bibl Haematol 42: 31, 1976.
3. Hoofnagle et al. Gastroenterol 72: 290, 1977.
4. Tiollais et al. Nature 317: 489, 1985.