Anticuerpo policlonal de conejo Beta-Catenin

Inmunógeno:

• Un péptido sintético derivado del centro de la proteína de la catenina β.

Especie: Conejo Diluyente Primario de Anticuerpos: K004

Catálogo:

• RP080: 1 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
• RP080-05: 0.5 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
• RP080-01: 0.1 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.

Uso previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijado con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizados por una persona (s) calificada al evaluar e interpretar los resultados.

Resumen y explicación: Las cateninas son proteínas citoplasmáticas estructuralmente relacionadas que incluyen las cateninas alfa (α), beta (β), y gamma (γ), de las cuales, beta y gamma pueden unirse a la cola citoplasmática intracelular altamente conservada de la E-cadherina. Las interacciones de catenina/cadherina desempeñan un papel importante en la adhesión celular. La β-catenina se ha encontrado en complejos con la porción supresora de tumor producto génico APC, la proteína de tirosina quinasa, y el factor de transcripción Tcf4.

β-catenina también se ha encontrado en complejos con la porción supresora de tumor producto génico APC. En las células normales, β-catenina se localiza en la membrana de las células epiteliales, lo que es consistente con su papel en la adhesión celular. En la mayoría de los cánceres de mama, β-catenina se localiza generalmente en las membranas celulares. Sin embargo, en ciertos carcinomas de mama, β-catenina muestra redistribución de la membrana al citoplasma y al núcleo. En el núcleo, β-catenina se une a la transcripción Tcf/Lef y actúa como un transcriptor activador.

La acumulación de β-catenina en el núcleo se correlaciona con la invasión local, metástasis y pobre pronóstico de los pacientes con cáncer. En los carcinomas del colon, la translocación de la β-catenina a partir de la membrana al citoplasma y/o al núcleo se correlaciona con la progresión del tumor. La inmunohistoquímica del β-catenina es útil para el estudio de los adenocarcinomas colonicos hereditarios no polipósicos y carcinomas lobulares de mama.

Formato: Fracción de inmunoglobulina purificada del antisuero de conejo contra la catenina β humana que contiene azida sódica como conservante.

Principios de los procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.

Dilución del anticuerpo primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Materiales necesarios, pero no suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ, no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles en Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.

Almacenamiento y manipulación: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día. La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deteriora y no se debe utilizar.

Recogida y preparación de muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.

Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificables según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados puede dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.

El tratamiento de los tejidos antes de la tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendado usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de tinción: Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro: Recomendaciones Diagnostic BioSystems

• Control positivo: Carcinoma de mama, Intestino grueso
• Dilución del concentrado: 1:50 – 1:100
• El pretratamiento: EDTA Buffer pH 8,0
• Tiempo de incubación y temperatura: 30 min @ RT
• Sistema de Detección: Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus – o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema Montage 360
• Tipo de tejido: FFPE

Control de calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Localización celular: Citoplasma y membrana celular

Limitaciones del procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de presentación

La dilución optima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.

Referencias

II. Koslov y col .; J Biol Chem 272 (4 3): 27301, 1997.
JJ. Dabbs DJ y col. Alabama.; Am J Surg Path. 2007; 31: 427‐437
KK. Hazan y col. ; J Biol Chem 272 (51): 32448, 1997.
LL. Bracke ME, y col .; Cur Top Microb iol Immunol 1996; 213 (Pt1): 123‐61
MM. Mastracci TL et. Alabama. ; Mod Path. 2 005; 18: 741‐751.