Wilm’s Tumor 1, WT1 Anticuerpo monoclonal de Ratón

Inmunógeno: Proteína G Anticuerpo Policlonal purificada de la producción in vitro C10000

Clon: 6F-H2

Especie: Ratón

Isotipo: IgG1, Kappa

Diluente Primario: K004

Catálogo y Descripción:

• Mob437: Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
• PDM177: Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Más – Sistema de detección de dos pasos.

Uso previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijado con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una persona calificada al evaluar e interpretar los resultados.

Resumen y explicación: El Tumor de Wilm (WT1), es un gen involucrado en la inducción del Tumor de Wilm, un tumor renal pediátrico esporádico y familiar. El tumor de Wilm está asociado con mutaciones del WT1, un factor de transcripción de zinc-dedo que es crucial para el desarrollo del riñón metanéfrico y el sistema urogenital. El gen WT1 se expresa prominentemente en riñón y el mesotelio, y se ha sugerido su expresión como marcador del tumor de Wilms y el mesotelioma. El WT1 se ha identificado en células mesoteliales proliferativas, mesoteliomas, carcinoma, cáncer de ovario, gonadoblastoma, nefroblastoma y tumores de células renales pequeñas.

Formato: Este producto se suministra como un sobrenadante de cultivo de tejidos y contiene azida sódica como conservante.

Principios de los procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHC) es un proceso de dos etapas que implica, en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés y, segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.

Dilución del anticuerpo primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems, deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción, cuando se utilizan con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado. El uso de cualquiera de los métodos de detección distintos a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse aproximadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.

Materiales necesarios, pero no suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles en Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.

Almacenamiento y manipulación: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas a las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de la preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día.

La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se está deteriorando y no debe ser utilizado.

Los controles positivos y negativos se deben ejecutar simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede explicarse por las variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con el Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.

Recogida y preparación de muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.

Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos del 0,1% no son materiales peligrosos notificables según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155/CE. El azida sódica (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir enfermedades infecciosas y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos por la boca ni entrar en contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua.

Tratamiento de los tejidos antes de la tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendada usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de tinción: Consultar la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro:	Recomendaciones Diagnostic BioSystems
Control positivo	Tumor de Wilms de control positivo y mesotelioma
Dilución del concentrado	1:50 – 1:100
El pretratamiento	EDTA Buffer pH 8,0
Tiempo de incubación y temperatura	30 min @ RT
Sistema de Detección	Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema Montage 360 / Highlighter
Tipo de tejido	FFPE

Control de calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica.; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Localización celular: Citoplasma y nuclear

Limitaciones del procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de presentación
La dilución optima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.

References
I. Haber et al. New Biol 4:97, 1992
II. Kumar-Singh et al. J Pathol 181: 67, 1997.
III. Menssen et al. Leukemia: 1060, 1995